< Ion Exchange Chromatography Orthogonal Analytical Techniques >


역상 크로마토그래피는 hydrophobicity(소수성)을 기초로 polypeptide를 분리하는 반면,
Ion-Exchange chromatography는 charge를 기초로 분리하는 방식이다.
이 두가지 크로마토그래피 방식은 서로 다른 분리 메카니즘때문에 종종 함께 사용되기도 한다.
두가지를 연속하여 사용할 경우, 그 효과는 상승적이어서 한가지 방법만 쓸때보다 보다나은
정화 능력을 제공한다.
Reversed-phase와 Cation Exchange에 의한 몇몇 peptide의 분리를 비교해보면, 두 기술이
보완적인 선택성을 지님을 알 수 있으며, 이로 인해 2차원적인 해결 능력을 제공한다.

을 살펴보면, Cation Exchange에서는 1가인 oxytocin이 먼저 elute되고,
뒤따라서 2가인 nearotensin, angiotensinⅡ, bradykinin의 3가지 peptide가 분리되며
angiotensinⅠ은 마지막에 elute된다.
그러나 역상에서는 oxytocin, bradykinin, angiotensinⅠ, nearotensin, angiotensinⅡ
순으로 분리된다.


*  The Benefits of Ion-Exchange Chromatography *

- 상대적으로 Reversed-phase에 비하여 sample loading capacity가 높다.
- 0.1 M NaOH, 0.1M acid, 6M guanidine과 같은 강한 시약에도 내성이 있다.
   (polymeric matrix에 의해서)
   상대적으로 crude한 용액은 ion-exchange에 loading 시킬 수 있다.
   (왜냐면 흡착된 matrix 성분이 강한 시약으로 제거되기 때문이다.)
- complex 깨기 위하여 urea, Acrtonitrile, non-ionic detergent 첨가


* The Benefits of Reversed-phase Chromatography *

-  소수성 혹은 분자 구조의 차이에 근거한 높은 선별성 제공
-  휘발성 buffer나 ion-pairing agent의 사용
-  ion exchange를 거친 염이나 buffer를 지닌 샘플로 인한 방해로부터 자유로움


보통 ion exchange가 먼저 사용되고, 이어서 reversed-phase chromatography가 사용된다.

가공되지 않은 샘플은 column damage 없이 polymer-based ion exchange column에
loading할 수 있다.  Ion Exchange는 복잡한 샘플을 축적하는 높은 loading capacity를 지닌다.

ion exchange를 거친, 염이나 buffer를 포함하는 부분적으로 정화된 polypeptide는
역상 컬럼에 loading될 수 있다. 염은 보유되지 않고, 역상 컬럼에 해를주지 않는다.
소수성이나 분자구조에 기초한 정제가 일어나며, 모인 샘플은 최종전처리 단계를 준비하며 휘발성
용액내에서 elute된다.