IV. HPLC Troubleshoot [ HPLC 사용시 문제해결방법 ]

0. 서론

1. Leak

2. 압력문제

3. Retention-time 문제 #5-8

4. Baseline noise

5. Baseline Drift

6. Peak Problem

7. Sensivity Problem

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(5) HPLC column 문제

(1) 오염물의 생성 또는 일반적 컬럼 기능 저하와 같은 HPLC 컬럼의 문제들은 Retention time의 밀림을 나타낼수 있다. 컬럼 효율성의 감소, 또는 플레이트 수 (N)는 좋지 않은 지연시간을 가지는 넓은 피크를 유발시킬 수 있다. Retention time의 밀림을 야기시키는 컬럼의 오염은 때때로 상대적인 피크의 넓이의 변화를 나타내며, 많은 수의 샘플 또는 오랜 시간동안 사용했을 경우 종종 발생된다.

(2) 만약 컬럼이 손상되었다면, 가드 컬럼을 교체 또는 제거하고 몇개의 샘플을 가지고 실험을 수행한다. 만약 문제점이 고쳐지지 않는다면, 강한 용매를 사용하여 컬럼에 있는 모든 오염물질들을 제거해야 한다.

이런 과정 후에도 문제점이 계속 존재한다면 컬럼을 교체하는 것이 좋다.

일반적으로 가드 컬럼은 항상 분석 컬럼을 보호하기 위해서 사용된다. 분석 컬럼을 강한 용매를 사용하여 주기적으로 세척하는 것은 컬럼의 수명을 늘리고, 컬럼의 오염을 감소시키는데 도움을 준다.

(6) HPLC column 온도 문제

HPLC 컬럼의 온도 문제는 주변 온도의 변화에 따라 컬럼의 retention time이 반복적으로 이동하는 것을 보여줄 것이다. Retention time은 온도가 1도 변할 때마다 2%만큼의 변화를 보일 수 있다.

그러나 실험실의 에어컨이나 히터를 사용하여 주위 온도를 일정하게 유지시키는 것은 어렵고 비용이 많이 든다.

비용적 측면에서 효과적인 대안으로, 컬럼 oven을 이용하여 컬럼의 온도를 주변 온도에 맞게 유지시키거나 약간 높은 온도로 높이는 것이다. 이러한 장치는 크로마토그래피에 영향을 주지 않고 재현성 있는 retention time을 유지할 수 있게 도와준다. 

(7) 샘플 및 주입용매

샘플과 주입 용매는 Retention Time 에 부정적 영향을 줄수 있다.

만일 샘플이 많은 양의 강력한 용매와 같이 주입된다면,  먼저 용출되는 피크들의 모양이 좋지 않고 재현성이 없는 지연 시간을 유발할 것이다. 이러한 문제점을 피하기 위해서는, 샘플을 가능하다면 시작하는 이동상을 이용하여 주입하여야 한다.

(8) Sample과 Injection solvent

제대로 되지 않은 샘플 준비는 가드 컬럼과 분석 컬럼에 빠른 오염을 유발시킬 수 있고, 이는 컬럼의 지연시간에 영향을 미치는 것 뿐아니라 컬럼의 수명도 감소시킬수 있다. 고체상 추출과 같은 적합한 시료 준비 기술을 사용함으로써 이러한 문제점을 해결할 수 있다.